提取单克隆抗体杂交瘤细胞总RNA，反转成cDNA。以cDNA为模板，以轻链可变区VL及重链可变区VH的前后引物PCR扩增全套VL和VH基因。通过两步法以VL和VH片段互为模板、引物，重叠PCR随机拼接VL和VH为单链抗体（scFv）基因片段。scFv连接到NdeⅠ和XhoⅠ酶切的表达载体Pet-28a(+)上，并转化大肠杆菌。通过Ni-NTA金属亲和层析法纯化单链抗体。利用ELISA和western-blot鉴定大肠杆菌表达的单链抗体。
