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不知道你看到的是啥文献，但最好找一个直接做DNA和GOX、HRP交联的文献。如果所有的实验操作（包括Crosslinking和PAGE）都没问题（别笑，有时候实验结果呈阴性就是因为一些小错误，比如PAGE加错了marker），能想到的可能：1. spacer的长度，DNA如果链长比较大，和较大的酶分子偶联，交联剂长度短了可能会影响效果；2. 交联剂的选择，以及目标分子（DNA、酶）的活化，Sulfo-EMCS是amine-to-sulfhydryl交联剂，包括NHS-ester和maleimide活性基团，是否适合你的 DNA-酶？你的DNA-酶是否需要预活化？可以看下ThermoFisher的Crosslinking Reagents Technical Handbook。 |