2024-12-31 07:11:29

用琥珀酸酐把小分子的羟基改造成羧基中出现的谜团,要怎么做?

大家好,我是生物专业的,现想用琥珀酸酐把小分子的羟基改造成羧基,再与蛋白中的氨基做脱水缩合反应,目的是把小分子与蛋白连在一起。具体反应条件如下:
1、50mg的琥珀酸酐溶解在500ul无水吡啶中,溶解条件:65度烘箱放置1小时,这期间每隔20分钟震荡一下。
2、1mg的小分子物质加入到上述溶液中,65度烘箱反应8小时,之后放4度冰柜静置过夜。
3、60度旋转蒸发半小时干燥,恢复室温。再用PBS溶解,进行下一步与蛋白氨基脱水缩合反应实验。
求解,大家帮忙看看,这反应条件那不合理,帮忙指出一下。

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生物化学×

3个回答

应该是琥珀酸酐和羟基反应成酯,同时产生一个羧基,然后你再用BOP或DCC将羧基和氨基缩合成酰胺就好

2024-12-31 07:14:01

楼主表述的不是很清楚,从字面上理解是小分子和蛋白质上的氨基直接连接,但是反应过程又是通过酸酐来反应,一边是酯,一边是酰胺。最好有反应式,让大家弄明白究竟是怎么回事。

2024-12-31 07:14:43

琥珀酸酐、吡啶和小分子混在一起,室温过夜即可,也可以稍微加热。

你的琥珀酸酐貌似比要偶联的小分子多得多,没这必要,1.2当量琥珀酸酐和1当量的小分子就可以了。
第二天,往反应体系中加入20ml二氯甲烷,再用0.5mol/L的盐酸溶液酸化成Ph值1-2的样子,水层分出来不要,有机层再用少量盐酸洗2次,有机层无水硫酸钠干燥之后浓缩干,就可以直接用DCC或者EDC脱水跟蛋白质偶联了。
前提是你的跟琥珀酸酐反应的小分子最好不带有碱性氮原子。
这种修饰蛋白质的课题以前见过,没啥复杂的。

2024-12-31 07:15:29

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