2025-03-28 07:26:47

甘油封片前细胞爬片需要晾干吗?

荧光染色完成后,不能马上采图,故需要封片置于-20度保存,我封片前是保持细胞片子的湿润的,封后放于室温晾一会儿再放到-20度。但采图时常发现细胞片子在载玻片上面滑动,导致细胞形态受破坏。咨询了几位老师,有人说你应该在封片前就将爬有细胞的玻片晾干,然后再封;有人说绝对不能晾干,全过程都要保持细胞片子的湿润!到底哪种说法正确?

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细胞生物学×

4个回答

这个问题我是有经历的,分析如下:
1、做免疫荧光染色,若用缓冲甘油或专用的防萃灭封片液(碧云天就有)盖片,需要立即用无色指甲油封片,前面的封片液是水溶性的,而后面的指甲油一会晾干后,就会牢牢固定好盖玻片的,之前移动一定要平拿平放即可。
2、做酶免疫组化染色,最终需要用梯度乙醇(由低到高)脱水,二甲苯透明,此时封片是在脱水干净的前提下封片,直接用中性树胶等非水溶性封片,若含有水分,则有大量气泡或玻片模糊等异常现象。
3、而楼主是免疫荧光染色,建议还是用水性封片液,最后用指甲油等加固即可。
请及时反馈试验结果,多多交流!!

2025-03-28 07:28:54

1、绝对不能干片,但应该尽量去掉多余的水分;
2、指甲油封的作用主要是防止其中的水分跑掉,且可以固定盖玻片;
3、不应该放在-20度,因为有冰晶形成,会导致细胞的结构发生改变;
4、保存应该在4度避光保存;
5、封片剂是甘油:PBS=1:1,量不能过多;
6、尽快观察。

2025-03-28 07:35:09

把多余水分吸掉,但片子不能干,可以自己体会一下。另外如果用荧光染料处理过你的爬片,可以使用anti-fade reagent 封片剂,这样将片子封上后。放到冰箱或者室温避光,第二天或者更长时间观察都没有问题。我们实验室用的是Invitrogen的ProLong® Gold antifade reagent封片剂(当然也可以选加了DAPI的封片剂,这样可以直接将细胞和染成蓝色),该封片剂说明书上提到如下内容,供参考(欲看更多关于该封片剂的信息,可以去这个链接:http://probes.invitrogen.com/media/pis/mp36930.pdf):

Remove any excess liquid from the specimen and apply 1 drop (or suitable quantity) of the antifade reagent to the specimen. Cover slide-mounted specimens with a coverslip; for specimens mounted on coverslips, place a drop of antifade reagent onto a clean slide and carefully lower the coverslip onto the antifade reagent to avoid trapping any air bubbles.

封片剂封片后,建议放到冰箱里,隔夜后,用指甲油将片子四周封起来,这样片子根本不可能滑动。如果封片剂封片后,立即使用指甲油,有可能导致片子滑动。实际上,片子之所以滑动,我认为两个原因:封片前片子的液体太多或者封片剂加的太多。

希望能对你有所启发!    

2025-03-28 07:40:16

我的经验,我们做爬片的荧光很好,经验在于,用玻璃滴管的小吸头,细心的剪下2道,正好将薄薄的盖玻片箍在载玻片上,周围再用做免疫组化的封圈笔画好圈,把处理好的载玻片放在湿盒中过夜,避光等都没有问题。
你可以去试试

2025-03-28 07:45:11

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