把抗红霉素的载体与目的片段相连转入大肠杆菌，为什么每次平板上面都长满了菌？

我想把抗红霉素的载体pMG36e与目的片段相连转入大肠杆菌，为什么每次平板上面都长满了菌。红霉素配好以后做过验证，是有效的。母液浓度100mg/ml 平板红霉素浓度为250ul/ml。已经试过五六次了，每次都长满，挑起来的菌加入液体LB（加红霉素）12小时内不长，24小时就长。另外，我的实验是将连好目的片段与pMG36e相连转乳酸菌做表达，求高人指点！

细胞生物学生物化学

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母液浓度100mg/ml 平板红霉素浓度为250ul/ml？25mg/ml？大肠杆菌：100-200ug/ml。

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2024-11-27 22:49:17

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你往培养基加时可能温度过高，抗生素失效了本人理解啊

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2024-11-27 22:59:43

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1.红霉素抗性的配制，平板浓度以及摇菌浓度：
红霉素抗性的配制：终浓度150mg/ml。（个别订单S组可以提供）
即1.5g Erythromycin 稀释到 10ml, 用100%乙醇溶解，注意：先加乙醇再加红霉素的粉末，会比较容易溶解。
红霉素平板浓度：300ug/ml，
即 300ml的LB固体培养基中加入600ug 的上述红霉素抗性母液
LB液体培养基可以浓度低一点，摇菌浓度在150~180ug/ml之间，
即 150ml液体培养基中加入150ul 的红霉素母液
2.培养温度：
尽量低温30°培养。Erythromycin is easy to degrade。
注意：对于红霉素温敏型质粒做载体的，必须低温培养，30°培养。

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2024-11-27 23:03:57

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