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2024-10-18 19:13:27

pski015转入EHA105不成功，怎么回事？

pski015转入EHA105，EHA105感受态的制备是CaCl2悬浮法，质粒冻融法转入感受态细胞，涂板总是长出很多，粘稠的一层，没有单克隆，更奇怪的是没有转入质粒的也能在抗性板上生长，重复了好几次都是这样

作物学植物学

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如果你涂板后有粘稠的一层，可能原因是涂的培养基过多，导致水分蒸发后所致。这样在抗性平板表面覆有一层不含抗生素的培养基，这样“没有转入质粒的也能在抗性板上生长”也就不足为奇了。你可以在涂板前先以5000rpm左右转速离心，沉淀菌体，然后倒掉上清，并留取约200微升液体培养基用以悬浮菌体，然后涂板，即可。拙见，谨供参考。

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2024-10-18 19:30:33

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你涂地量还是太多了，你可以将复苏完的菌吸出10微升稀释到1毫升，然后再吸适量的菌液涂皿应该好一点。

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2024-10-18 19:32:49

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100ul可以你EHA105抗链霉素和利福平吧另外你PSKI015用AMP还是Cb抗性？

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2024-10-18 19:33:57

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我做的也是这样，我是用玻璃小圆球在粘稠状的菌上面滚几下，用无菌重蒸水稀释一下，再涂到加有抗生素的培养基上面，再培养，再挑取单菌落PCR检测。你试试了，我这样做就有结果了！

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2024-10-18 19:35:15

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