多久了？    

你这是什么组织？我们一般用的12000rpm离心，你这转速有点低呀，可以提高转速试试。

为什么不控制温度？trizol的说明书上写的4度12000转/分钟 离心10分钟啊

加200μl氯仿（按1ml Trizol加200μl 氯仿比例），用手来回剧烈颠倒充分混匀，溶液变乳白色，静置5min；（该步骤是否分层不能作为成功与否的依据）
4℃12000g，15min，离心；
取上清，550-600ul，加入等体积异丙醇，-20放置20min；
4℃12000g，15min，离心；    

我用人外周血提过总RNA，用的是invitrogen的trizol LS，说明书上是混匀氯仿直接12000g离心10分钟，每次都是分层很明显的，不知道你的试剂说明书是怎么写的，我觉得前面的2000rpm离心可以不进行。

首先是转数，我们以前用的是12000转，离心后取出来时得小心，避免震荡。 再就是样本量啦，太少分层比较不清楚。