你的问题和我的很像
P1 P2 细胞很典型
到了P3以后细胞宽大，很多突触状，没有明显的极性，也没有立体感
我要做后续诱导的，这样的细胞让人很担心
1，细胞老化
可是第三代就老化，这让我较费解，细胞老化的几个常见特征并不可见
2，血清
我用的是GIBCO的血清
照样出现这样的问题
3，细胞密度低，充分舒展而至
这是布兰卡的观点，我也有这样的看法，我有几皿密度高一点的细胞，发现铺展的并不是很宽大

关于黑点点，我的培养液里也有
我觉得不是黑胶虫，如果是黑胶虫，细胞一个都活不了，可是我细胞却好好的
我觉得可能是细胞代谢后的碎片之类的东西    

我的细胞P0长的很好，很明显的集落式的生长。我一般都1传2，原代是用一只3-4周的大鼠，接种两个25CM的培养瓶，即每个培养瓶接种一侧的股骨+胫骨。有的原代细胞长的比较满所以1：3传代我也试过，但是感觉传代后密度有点低了。

1.P2的细胞长的也挺快，有的在传代后第二天就能长到80%，有的瓶子在4-5天长满80%。细胞在瓶底分布不十分均匀，在细胞比较密集的部分感觉形态比较典型，成旋涡状生长，是长纤维状的。但是细胞比较少的部分就觉得有点宽大扁平了，可以看到比较扁平的多边形细胞。-------------------不知道这个是不是因为细胞密度低，充分舒展而至。最让人郁闷的是P3代细胞长的就很慢了，传代后有的瓶子里悬浮细胞很多，贴壁细胞比较少。贴壁的细胞有的比以前变小了，类似圆形，好像是凋亡回缩了。

2.细胞老化。不知道你有没有仔细看过你的细胞里有没有黑色的颗粒，我的有的细胞里就有，查资料说这是老化的标志，甚至有的细胞里有空泡形成，有人说这是脂肪分化了，但是我也没有做红油染色，也不知道是不是这样。我也不太清楚为什么这么快就老化了，我们学校普外实验室的同学传到第六代状态都还是很好的

3.血清问题。我的血清虽然是进口的，可是我觉得周围人用这个牌子的不太多，所以我就担心是血清的问题。但是楼上说用Giboco的血清也有点问题，我就怀疑是不是血清浓度的问题。不知道你是不是也是用10%的特级胎牛血清。不知道有没有可能是营养太好的原因，记得之前看过原代用10%的，传代后用8%的，我没这样用过，但是很多人没有改变血清浓度照样细胞养的很好！

4.黑胶虫。我培养瓶里的黑点点仔细看的话，有少数确实在原地翻动。但是很多人的确不认同黑胶虫这个说法。

我们实验室细胞状态非常不稳定，有的时候就养的很好，状态很好，可以传代7-8代都没问题
但是有的时候就不行
我们实验室用的都是一样的东西，IMDM培养基，10％胎牛血清，GIBICO的
胰酶是自己配的
我怀疑跟取材有关系
一般如果原代长的很好，细胞活力就会好
原代要长到铺满整个皿底，全部集落化才好

请问你解决黑胶虫鉴定和处理的问题了吗？我也遇到同样的问题了

这是MSC细胞，生长也还可以。

可是放大一看，细胞周围及表面均是细小的黑色颗粒，不知道是不是黑胶虫。