我现在在做桑的查尔酮合酶基因的表达,问题是genbank上没有桑的查尔酮合酶基因的全长序列,根据查的资料上的与之相对接近的蔷薇科等植物的查尔酮合酶基因的资料设计了引物然后再PCR之后得到一段序列,请问有没有人知道该如何证明它是桑的查尔酮合酶基因呢?不然的话我下步定量就没有意义了?
你要把你扩增的片段连接到T载体上测序,然后在genebank上进行序列比对,看看是不是查尔酮合酶基因的序列。
如果是就可以做定量了。
如果不是那就没有办法了,你就的重新设计引物,或者你只能根据几个物种的查尔酮合酶基因的序列来设计兼并引物,扩增片段然后测序,确定是不是查尔酮合酶基因的序列。
你根据其它物种设计的兼并引物?连接到T载体上后,提取几个阳性菌落,摇菌后,然后取一定量的菌液送给公司测序。一个反应也就几十元。有人喜欢直接把PCR产物送去测序(要知道引物序列的情况下)。不过我不太赞成这样做。你根据你的情况来考虑了。