|
2024-10-17 21:25:50
SDS-PAGE电泳时条带在分离胶内，条带弥散不齐是什么原因？最近在跑SDS电泳时，突然间条带就压不齐了。 上样后，条带在浓缩胶内压成一条直线，但自从进入分离胶后，压齐的直线开始逐渐向下弥散，条带跑至中间位置时，变得很宽，宽约1cm，最后跑到底部时，条带也能压齐。 但是经染色脱色后，发现蛋白条带边缘不清晰，一些细小的条带变得很模糊，分离效果还可以，但明显不如从前。我们实验室一直采用恒流跑得，一直沿用这个条件，都没有问题，最近才出现这个怪异的现象。但是，时间没有变化，仍然是1小时左右。30%丙烯酰胺，Tris PH8.8，AP都检验过没有问题，有谁遇到此类怪异现象？补充，考马斯亮蓝前沿出现弥散！ |
4个回答
|
检查两个东西，一是running buffer，看看配制有没问题，另外跑胶的时候注意有没有漏。二是重新配胶，有时胶未混匀和没凝好，会出现这样的问题。三是天冷了，胶凝的太快了。可以考虑放37烘箱凝固。 |
|
出现问题时所上样的蛋白和以前没出问题的时候蛋白是一样的吗，有时候蛋白提取制备有问题也可以造成跑胶怪异。我们实验室有一次跑出的蛋白条带不清晰，分析可能是因为提取蛋白时不小心吸取到了沉淀。 |
|
我们一直是用恒压跑的 效果也不错 你可以试下 电压开始80V 待maker基本分开后改为120V 大约30分钟 后面大约1小时 看胶的浓度。 补充一点：如果样品受污染了，或者样品浓度太高了，也有可能出现这样的结果。 |
