我的目的蛋白在大肠杆菌中表达，可溶形式。但是目的蛋白的纯化出现了问题，该蛋白是一个融合蛋白，两个蛋白的等电点分别是8.4和4.2，用DNA star 分析该融合蛋白的等电点为4.8左右。我试过阴离子柱（Q，DEAE）PH7.0，8.0 ，9.0目的蛋白都是在硫穿当中，大部分杂蛋白挂在了柱上，但是杂蛋白结合的并不彻底，还有很多杂蛋白。阳离子柱（CM，SP）从PH4，4.5，6，7，8都试过都不结合，杂蛋白基本也不结合。疏水柱子也试过，结果都不理想，实在不知道还能怎么做。感觉两个蛋白融合后，可能构想就变了，其中等电点是8.4的蛋白有3个二硫键。我曾经想让蛋白表达形式为包涵体，可是不论怎么样都在上清，诱导5小时后蛋白开始降解。尝试了低温诱导，低IPTG诱导，改变过大肠杆菌的表达菌株，结果都没有用。哪位高人指点一下吧，谢谢！