我只有理论上说两句供你参考: 1、你可以直接转入合成的sRNAi片段,其实最初的sRNAi技术就是这么做的。但是这样的效率不高,且不够稳定。重复性差。条件苛刻,也就是不容易做好。 2、将sRNAi片段插入适当的质粒基因组中,让质粒将它带入靶细胞,因为质粒可以自行复制,入细胞后可以复制、表达自己基因组中的基因(包括插入的sRNAi),这样就可以使细胞内的sRNAi片段多起来,达到发挥作用的浓度。(虽然这个浓度不要求很高,但这种方式肯定比直接转染sRNAi片段多,且有效。) 3、将你的sRNAi连上质粒基因组后转进去表达(利用的这个质粒叫:载体),是长久还是瞬时?这要取决于质粒(载体)。严格的说除了立逆转录病毒载体,其他的都是瞬时的表达,细胞传代后均有可能消失。当做也不排除有较稳定的(在选择压力下,比如新霉素抗性等,或者营养依赖,选择等)。 4、利用质粒进行sRNAi,因为质粒上可能有标记,便于检测你的效果。建议先理论弄明白,做的过程中出现问题便于分析。 |
转染是一种实验手段,就是把核酸转移进入细胞,sRNAi是把小RNA转染进入细胞,通常说的转染是将质粒转移进入细胞,只不过两者目的不同,sRNAi目的是沉默基因,通常说的转染是表达蛋白。 |
商业合成的siRNA是用化学方法直接合成的,通常就是一对大概23bp的双链RNA,它可以在细胞内诱导接连成小RNA 即我们常说的沉默RNA,用于直接沉默目的基因的转录体,迅速高效但是沉默时间是瞬时的,而用质粒载体时,需要构建表达载体,载体上选择合适的启动子,报告基因 和有效的沉默序列是必要的。表达载体一般能在细胞内或体内稳定存留一段时间。可以稳定表达沉默片段,从而达到沉默基因的目的。 |
提问时间: | 2025-01-19 |
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