研究erk与perk变化，结果发现内参齐的，但是erk不齐怎么办？

做药物干预肿瘤细胞实验，研究erk与perk变化，结果发现内参齐的，但是erk不齐，而且erk与perk结果是相反的（就是相比对照组，用药组的perk显著增加而erk却下降）。审稿人意见是“ Authors must discuss this potentially important result or analyze if the antibody against total ERK does not recognize this protein when is phosphorylated. ”。求大神解答下，我该如何回答这问题？

细胞生物学生物医学工程

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如果你作用时间不是短时间（2h以内），ERK自己的表达水平发生改变（含基因表达或ERK的稳定性），会产生这样的结果啦！

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2025-01-20 17:36:38

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首先，提供抗体说明书，看抗体针对的位点。其次，做一个ERK的qPCR，自己先有个数mRNA变没变第三，ERK是两条带？

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2025-01-20 17:42:22

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这是CST网站上写的， Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic peptide corresponding to residues near the C-terminus of rat p44 MAP kinase.近C端的，人的erk1有380aa，我觉得识别区肯定到不了202/204。你前半句话是对的，后半句话未必，要看刺激时间了，长时间totalERK估计就变了。但是如果你想看pERK的话，理论上应该是保证totalERK不变的

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2025-01-20 17:54:33

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你的结果是反应出不同时间点的ERK和p-ERK的水平，有变化是正常的。你可以从蛋白表达调控角度去分析。

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2025-01-20 17:57:31

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1.像EGF或FBS激活ERK只需要10分钟，你刺激的时间都是4小时起了，会造成ERK本身蛋白含量的改变。所以建议增加短时间刺激ERK的western图2. 编辑的问题很好回答，查抗体说明书，total-ERK的识别是哪段序列，一般不会设计到磷酸化位点区的3.实验重复三次，可以用image J之类的定量软件normalize一下你的结果，最后直接放柱状图上去，不要用western图了

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2025-01-20 17:58:41

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