lipo3000转染siRNA,说明书上说转染前细胞密度达到70-90%。转染后换的完全培养基,细胞不断增殖,想72h后提蛋白,但根本不到72h细胞就早长满挤死了,请问中途能传代吗?或者有什么更好的方法?谢谢
可以传代,没有必要非要等到快长满了再转染
如果细胞普通生长速度的话或者倍增时间大于24h,30%-40%左右都可以考虑,
另外,转染时你的细胞的FBS浓度也是个环境。
可以参照JBC上类似的文章,看他们的实验方法是怎么写的,一般很详细~
转染前密度低一些就可以了,灵活掌握,不用非得按说明书来。
转染换液后就可以传代了
30%-50%就可以转染了,不要等到密度那么高,没必要,密度高了反而转不进去,我一般30%作用转的,效果不错
我们用30%的接种密度都没事
lipo 2000转染就不能含有血清和抗生素, 我们转染时候用gbico公司的opti-mem培养基,效果好。转染4-6小时后换液,换成含有低浓度血清的培养基
7. lipo3000过表达,做了几次,3T3细胞,效率还不到10%,用的无血清DMEM稀释,混合后加入到DEME有血清的培养基中,不知道哪里不对,效率那么低,混匀的过程有说不能吹的,我不知道有没有影响