uM 是指微摩尔每升吧。先算下你打算配成多少摩尔浓度的，一般10um工作液的话可以先配成10mM或者1mM的母液，再算稀释多少倍到工作浓度
一般高浓度母液也有利于保存。DEMO稀释后保证体积比小1%，不会对细胞造成毒性就可，当然需要加一个溶媒对照组。DMSO不需要过滤除菌，如果你试验只观察24小时左右更不需要了.加抑制剂后加刺激因子，有的是更换掉，需要洗，有的是抑制剂刺激剂加在一起，不需要洗，看你试验的目的需要的。再仔细看看相关文献 

洗，我做完了，洗和不洗都试了，洗过后细胞的增殖还是明显受抑制了，所以说预处理还是有作用的。做完后除掉阻断剂，因为通路阻断剂本身也是一种杀伤药物，不洗对结果有影响。 

我的抑制剂，文献里是提前半小时先加抑制剂，之后换成含或不含刺激剂的培养基，但仍含有抑制剂，有时正文里没详细说，在图表说明里有。
你不妨2种都试试看看什么结果。我倾向于整个过程都加抑制剂，否则除非你的抑制剂是长效稳定而顽固地占有靶点，否则在接下来的n多小时你不能保证抑制剂都起到抑制的作用，完全地抑制了？效力减退只能抑制一小部分了？这就没有说服力了。 

同意整个过程都加抑制剂，比如开始是2ml的体系里面加了抑制剂，后面直接加入干预因素就行了，只需要保证干预因素的终浓度正确就行了，不需要中途把抑制剂洗掉。不知道我说的对不对。 

我觉得洗不洗不太重要，主要是之前抑制剂的作用，后面都是一样要加处理的。 

我觉得还挺重要的，很多信号的抑制剂长时间作用对细胞会造成生长抑制和促进凋亡的作用，即使设置对照，后面的处理引起的效应就大不一样了！