western blot条带异常，怎么办？

做了四次，每次都这样，请大家帮忙分析分析啊

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信号转导

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建议中间转膜后用丽春红染料观察下膜上的蛋白条带是否清晰！

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2017-02-11 14:55:47

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可以提高分离胶的浓度试试

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2017-02-11 14:57:03

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看你的膜上面各种点状杂志，有可能是封闭液污染了，或者里面的牛奶颗粒没有化开。再就是你的蛋白信号看上去成一团，而不是条带，这个有两个原因，1.跑胶没跑好，跑得过快或者跑过头了，蛋白弥散了。2.样品load样过多了，目的蛋白太多了，这种情况下，加显色液黑暗处裸眼都能看到发光的蛋白带，曝光肯定是曝不好的，要不是过曝，一团黑，要不就是信号淬灭，结果会像你的膜那样。你仔细想想是哪处理问题呢

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2017-02-11 15:02:43

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特异性有问题

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2017-02-11 15:05:47

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抗体不行

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2017-02-11 15:19:02

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内参出现这个情况，我觉得可以考虑一抗的问题，感觉一抗污染了，可以借用一点别的实验室的试试，我们用的Santa的还行。目的蛋白的话，如果你手法没问题，那这就是个难做的蛋白，建议查抗体附带的说明书，有的蛋白是不能用常规方式的，有的一抗不稳定，需要四度过夜，有的配抗体的缓冲液不同的，说明书一定要看，查里面的文章，参考条件，个人认为WB的条件应随蛋白变化，好做的无所谓，不好做的适当提高一抗二抗浓度，还有显影手法特别重要，你这个虽然糊了，但条带可见，还是有希望的，显的浅一点，看出变化，再考虑做的完美的问题。谢谢参考

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2017-02-11 15:26:25

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抗体的事，胶也有问题，检查一下你配胶的配方有没有问题

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2017-02-11 15:30:32

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提问时间：	2017-02-11
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western blot条带异常，怎么办？

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