既然四复孔均一，而且结果也有很意义的。我想是否会犯一个我曾经犯过的错误－－把24孔板的左右搞颠倒了？
miRNA转染细胞后可能会引起靶蛋白水平的升高，但在报告基因水平应该不会存在不降反而升高的情况。建议再重复一两次看看是否有重现性。 

记得PNAS的一篇文章说dsRNA转染会让某些目标蛋白水平在初始抑制后反而上升，这种现象一般好像出现在48小时以后，具体机制不太清楚，不知道这个reporter assay会不会有类似的现象。 

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　　该现象很可能说明该miRNA与靶不是直接的关系！！miRNA mimics是模拟生物体内源的miRNAs，运用化学合成的方法合成，能增强内源性miRNA的功能。而miRNA inhibitor是化学修饰的专门针对细胞中特异的靶miRNA的抑制剂。人工合成的miRNAs既能够特异性地沉默单一基因，也可以同时沉默多个相关但不相同的基因。即所谓的“OFF　TARTET”现象。最后的实验结果应该是OFF　TARGET的总和。
　　所以要明确miRNA与靶是否直接相关，最好不要用MIMICS，毕竟这只是模拟。不能真正反映该miRNA与靶的直接关系。
　所以最好把miRNA连同两侧各200bp左右的序列直接克隆出来，再做实验，观察其蛋白水平及荧光素酶实验结果。 

1.细胞密度及转染效率也是影响实验结果的很重要的因素，不知你是否能确认转染效率一定没问题。

2.该细胞的microRNA的丰度如何？如果内源性含量比较高的话，外源性的进来可以也不会有太明显的改变，你是否在选细胞株时注意到这个问题。其实抑制相对来说比过表达更容易出现效果，要不找一株该microRNA含量较低的细胞株做做。