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2024-12-22 18:59:08

转膜电流如何确定？

第一次做WB，我的目的蛋白是27KD。有经验的同门给我的建议是转膜93－96mA，1－1.5小时。做了四次，每一次的marker都转上了，但只有一次出来了蛋白条带，弱，细。我想是否转过了？这次我85mA,1h，可是连NC膜的背面和下层的滤纸都染上了兰色的marker条带，这是否说明一定转过了？到底转膜的电流和时间如何计算呢？按照0.65－0.85mA/cm2，我的膜一般4*2左右，那岂不是很小的恒流？

生物化学药理学

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3个回答

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我使用过的是biorad semi-dry 电转仪。参考书上一般都要求恒流，也有一些计算公式。但是我从一开始就是用的恒压转膜，而且工作的很好，没有问题。我从前做的蛋白是22kDa,我一般使用24v 50分钟就好了。western blot没有问题。

现在我做的蛋白80kDa，15v 75分钟转移效率也很好。所以我建议你可以采用15~20v 50~60分钟就好。并且，我使用恒压的时候，最后电流一般稳定在20mA左右，所以我认为你的电流太高了。

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2024-12-22 19:16:44

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200mA 60分钟足够了（膜的面积是5cm*5cm左右，如果大就加长转印时间。只要室温不太高，有配套的冰盒保证缓冲液温度别太高，试验应该就能做好。片段再长就相应加长时间。

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2024-12-22 19:17:32

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一般推荐干转恒流，湿转恒压也可以，个人认为和你的仪器有关。我做过28kd的，bio-rad 的semi-dry 转膜仪，恒压15v，15min效果不错。电流值忘了，事实上也没太大的参考价值，因为用的滤纸不一样，电流肯定不一样。

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2024-12-22 19:25:57

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提问时间：	2024-12-22
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