3个回答
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最好仔细研究为什么不挂柱,你可以选择载量更高的填料,如果你不需要活性可以在变性条件下去纯化,总之最好是先选择镍柱,别的都很难摸条件得到好的结果. |
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常用的阳离子主要有两种：一种是CM52，价格比较便宜，但是结合能力稍弱。重复使用的次数比较少。一种是SP，价格比较贵一些，但是结合能力比较强。比较推荐。 |
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我建议还是做亲和，目前我没有遇到是挂不上的带his标签的蛋白，一个公司的填料不能代表所有的填料不行，离子交换不能使你一次得到纯品，然后又加凝胶柱子等，这样就没完了。你可以选一份新的镍琼脂糖凝胶试试.我也见过用一些填料挂不上，但是换个填料就可以的。每家公司的填料都有不一样的地方，并非都适合自己的蛋白，这就需要找专业公司的原因。还有上样的浓度不能太少了，见有个人是这样的原因，加大上样量就解决。所以不能轻易放弃，还有按你说的只用那么点量，估计你不是过柱子的方，如果你样品浓度不高，而填料又少，这样混合的方法是难吸附很好的，需要多用点填料，用过柱子的方法更好。 |