有人做western blot转过大分子量蛋白么？

150kd.做了好多次都是大白版.欲哭无泪.
6%的胶,转膜时间1小时-2小时都试过.
哪位大侠能指教一哈,怎么办啊.

细胞生物学

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我没做过这么大的蛋白,但我的实验中用的预染marker最大的是175kDa,12%的胶,湿转2个小时左右一般都能转过去的,我想你的蛋白10%的胶应该就可以.这些条件你可以试试

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2025-03-20 03:43:59

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150kd应该还是蛮容易转的，我们实验室转过250kd左右的，不过不是我做的，具体操作不太清楚。

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2025-03-20 03:44:18

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转的时间短，我做过ATM，湿法低电压转过夜差不多20小时
一抗反应时间要长，4度多放几天
我做的这个结果不太好，但条带还是有的。我师姐说我一抗的时间不够。

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2025-03-20 03:44:39

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我做的是145KD的，而且磷酸化的也做了，效果还好，建议：
10%的胶，跑3小时（4度），转膜2小时，希望对你有帮助。

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2025-03-20 03:45:02

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150ＫＤ的分子跑８ＰＥＲＣＥＮＴＡＧＥ　的胶就可以，可以让溴酚蓝跑光再加３０分钟，在胶中上三分之一处应该有你要的蛋白，转膜湿转比半干要好，１００Ｖ；３Ｈ应该足够了．

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2025-03-20 03:45:22

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我做过125kd的，8%的分离胶，跑胶条件：80V 30min，120v 跑到所需最小分子量到底转膜条件300mA,4H，一直出的挺好的

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2025-03-20 03:45:40

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