Western Blot“淬灭”的原因主要在两方面：含HRP的抗体和发光试剂。由于长期应用某种发光试剂，人们多注意了抗体，不知道发光试剂其实也会对实验结果造成重大影响。对抗体方面来说，可以采用适当降低抗体的浓度，发光实验时快速操作来解决“淬灭”的问题；对发光试剂来说，可以选用发光稳定的发光试剂来解决“淬灭”的问题。注意膜上不要带气泡，有气泡的地方是不会发光的。

如果ECL没过膜，然后再将膜从显影液里夹出来，尽量控干液体，再放在另一个容器（培养皿之类的）曝光，不能带着显影液曝光。

标准操作如下：1、进行常规电泳、转膜、HRP标记抗体或核酸探针孵育、洗膜。

2、新鲜配制发光工作液：分别取等体积溶液A和B混合，放置使之升到室温否则会减弱荧光强度。建议立即使用工作液，室温放置数小时后仍可使用，但灵敏度略有降低。3、用镊子取出膜，搭在滤纸上沥干洗液，但勿使膜完全干燥。将膜完全浸入并与发光工作液充分接触。4、用镊子夹起膜，搭在滤纸上沥干发光工作液。但勿洗去发光液。5、在X光胶片暗盒内面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将杂交膜贴在保鲜膜上，将保鲜膜折起来完全包裹杂交膜，去除气泡和皱褶，用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖杂交膜的保鲜膜固定在暗盒内，6、在黑暗中放入X光胶片，分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。步骤1-5可在日光灯下操作；但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免。