我的细胞转染质粒以后目的基因的mRNA升高很明显,但是表达的目的蛋白几乎没有增加。请问各位大神这是怎么回事,需要怎样处理?
1. mRNA水平上升,并不一定意味着protein表达量会增加,两者不是绝对线性关系。2. 如果你的检测体系是否ok?例如该蛋白有可能分泌蛋白而你只检测了胞浆中蛋白的量等等。。。或者,你选择的表达体系是否能满足该蛋白高表达的需求?即车间的产出量能与原材料的提供量保持线性关系??3. 蛋白的功能更重要,在功能实验上看看怎么样?
1移码,2抗体无效,3抗体表位不识别 isoform这样的 表位缺失,4基因太大 不表达,5其他原因的cDNA正确 却不表达
用micic或者cdna