我在细胞漂浮一半左右时收集细胞,后冻融离心,收集病毒液于纯培养基中,提取病毒后转染,但是感染目的细胞之后,一点荧光都没表达,是怎么回事呢?
不要等到漂浮,显微镜下看到病变明显就可以了,3天左右的样子
转染时293细胞的代次一定要少,细胞状态要好。用LIPO转然后现有少量细胞出现绿色荧光,随后荧光面积逐渐增大,出现大量“彗星”,这时就可以收了。时间不是个定数,可能2天,也可能3-4天。
你要怀疑你的病毒是不是有绿色荧光标签。其实如果有的话在293里面就能看出来,不必非得等到感染目的细胞。而且你冻融感染后的293肉眼就能明显看到细胞都是绿色的。如果没有那得追查你的病毒来源。