2025-02-07 07:24:55

进行树脂洗脱,开始水洗接着用10%乙醇洗脱,洗了好久还是有颜色和开始没什么明显变化,这是什么原因?

目前正进行树脂洗脱,样品主要是黄酮类物质,开始用水洗,大约6-8bv就完成了。接着用10%乙醇洗脱,洗了好久还是有颜色,好像和开始没什么明显变化,这是什么原因啊?

是不是说明该洗脱组分里面目标物质含量比较大,所以洗脱量也加大了?由水相更换成10%乙醇是有很多气泡,是不是这也是影响分离的原因之一?.洗脱的时候,不同梯度之间,目标物质含量多少与洗脱量大小关系如何?有什么办法能尽量快一点啊?


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5个回答

如果要的是黄酮类成分,可以在洗脱的时候用盐酸镁粉反应鉴别以下是否有黄酮洗下来。每种药材是不同的,提取纯化方法只能作为参考不能照搬。上柱洗脱颖多考察几个纯度,确定出临界醇度。如果10%的醇洗一直有颜色,而你要的成分用多少的醇洗,可以在临界醇度以下增加1次洗脱。在上柱纯化的时候一个原则,洗脱出杂时,尽可能多的洗去杂质,根据杂质的种类和性质改变纯度、pH等条件,在洗脱收集阶段尽可能多而纯的收集目标产物,所以收集时的醇度一般不应于最后一次洗脱除杂事的醇度变化过大。我们在做的时候,一般变化都在15以内。


2025-02-07 07:31:23

乙醇还梯度的时候产生气泡是很正常的,不用担心,当然,肯定不如没有气泡效果好,但是大孔吸附树脂本身就是靠吸附的原理,吸附和解吸是不断进行的,因此,其本身就是一种粗分手段,洗下来的部分一般以后还需要进一步纯化或者直接以部位的形式做药理,那么这步就不毕也不应当要求那么严格(当然,这也有个度)。


2025-02-07 07:33:39

柱层析洗脱阶段是否结束千万不要看颜色,很多有颜色的东西你认为有用,可能不是你要的东西,有的时候洗脱的无色清澈,可能里边有很宝贵的成分,因此,一切要以定性鉴别洗脱部分的实验来判断,看颜色只能说明洗脱在进行罢了。.做大孔吸附树脂注意一点,乙醇浓度加大以后树脂会膨胀,一定要用好柱子,免得把柱子胀裂了,千万注意!


2025-02-07 07:43:55

柱层析别着急,有时候你要是追求快,可能即便做完了也是白做,许多成分混杂在一起,还得重新做。


2025-02-07 07:52:25

刚开始实验,粗分,不要做的太细,每个梯度3-5个柱体积就行了,不管颜色如何都可以换洗脱剂,目的主要是分段,加快时间。不可能一根柱子就得到纯品的。一般做到后面杂质比较少的时候才会做的很细致,包括柱子所有的参数都有影响:如吸附剂颗粒粗细,吸附剂比例,柱的长短,流动相比例,体积,流速,甚至温度等等。

2025-02-07 08:00:30

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