NF-kB的激活一般指p65磷酸化后从胞浆转运入核, 而65总蛋白包括磷酸化和非磷酸化的P65。可否提取核蛋白,WB法测其p65总蛋白表达。是否必须分别测胞质胞核p65。还是应该测胞质胞核磷酸化p65?因为听说磷酸化的P65比较难做,可否不做 磷酸化。 实验时间有限,希望只测一个蛋白。望大侠相助~
最好分别提取胞质和胞核的蛋白,这两种样品都测磷酸化p65(p-p65)和总p65(p65),这样才说明问题,这才是WB这一个指标,另一个指标是免疫荧光法测p65入核,也很有说服力。WB和免疫荧光都测的话,比较严谨。如果你只测一个蛋白,最后被审稿人拒回来,有可能更浪费你时间的
最简单的就是测总蛋白内p-P65的水平就可以。严谨的,核蛋白再测个p-P65