可以理解为NC膜或者PVDF膜上有很多洞洞，通过电转，胶上的蛋白被转移到了膜上，塞进了很多洞洞里面，但是你也知道，蛋白并不是连续的，有很多空隙，而且比如说样品孔之间也有空隙，这些洞洞并没有填进东西，而抗体也是蛋白，也会被吸附在空的洞里，这样，就会有很多非特异性的信号，但如果用富含蛋白的封闭液与膜作用，那所有的空洞都会被BSA或者酪蛋白填满，这样，抗体蛋白就不会被非特异性的吸附到膜上，而只会跟特异性蛋白结合。

从抗原决定簇的角度来说可能会更好一点。抗体是识别抗原决定簇，然后与之结合，奶粉和BSA起封闭作用主要是通过蛋白起作用的，就是能够非特异性地将表面的抗原决定簇结合，这样特异性的抗体就不会跟这些非特异性的抗原决定簇结合，这样背景就会降低。可能有人会问，那目的蛋白为什么不能被封闭掉？因为抗体跟目的蛋白的结合是非常特异的，结合能力很强，封闭之后依然能够结合。当然如果封闭是太长，也能影响抗体的特异性结合，导致最后显影信号变弱，这就是有时候封闭时间长了信号变弱的原因。同样，通过延长封闭时间来去除非特性条带以及免疫组化中延长封闭时间降低背景都是这么个原理。

我再抛出一个吸附-洗脱假说，来解释封闭不仅可以降低背景，而且可以使杂带信号变弱的原因，大家看看如何。Western Blott用的膜和蛋白质纯化用的柱类似，都是对蛋白进行了吸附，包括胶电转到膜上的蛋白以及封闭所用的奶粉和BSA等都是对膜的一种吸附。这种吸附作用的机理是包括疏水作用、静电、范德华力等等的综合作用，都是非特异性的。本人认为，封闭时的封闭蛋白不仅是吸附到膜上的空白位置，而且还会和膜上已有的蛋白（目标蛋白和杂蛋白）产生竞争性的洗脱作用，而不是和膜上的蛋白产生结合作用。即不是用封闭液封闭杂蛋白的非特异性的抗原决定簇（用抗原决定簇这个词不是很妥当，但好理解一些），而是将杂蛋白从膜上部分洗脱下来，从而减轻了非特异性的条带信号。这种洗脱也会对目标蛋白产生作用，同样减轻其条带信号。用吸附-洗脱假说来看封闭的操作，就能明白为什么封闭液的组成、浓度、时间等等要素的对WB的影响。封闭液中要有可以和膜产生非特异性吸附的分子量适中的蛋白，太大了可能对邻近的目标蛋白产生位置阻碍，太小了容易从膜上的孔洞里脱落。封闭液的pH，盐，表面活性剂等一方面影响封闭液中的蛋白与膜的结合吸附，另一方面还会对膜上的已有的蛋白产生不同洗脱作用，这也是WB中选用不同封闭液的原因，即为了尽可能多的洗脱杂蛋白，尽量减少对目标蛋白的洗脱作用。封闭液的浓度越高，封闭时间越长，对膜上孔洞的覆盖越好，由于竞争性的作用，对杂蛋白的洗脱也越好，但对目标蛋白的洗脱也越强。也就是说在相同曝光条件下背景更干净，杂带更淡，但目标条带也更淡。