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500多kd啊，的确不好做。找了一些资料以供参考：1.将单叉和双叉的比例由1：29改为1：60，这将极大的增加胶联的孔径。2.分离胶用6%，浓缩胶4%，在剥胶的时候会发现胶非常的稀软，像鼻涕一样，但它毕竟是成型的，有一点耐心，小心的把它从板子上剥下来。3.转膜：虽然湿转更好，但当时实验室只有半干转膜仪，于是加大电压1h，就OK了，时间再长就太热了。4.孵育抗体什么的都是一样的，但是建议蛋白上样量大一点，毕竟转膜不会转的很干净，会有损失的，而且大分子量的带一般不会很平齐，因为分子量大很多是由于糖基化修饰的缘故，每个蛋白不能保证都修饰的一模一样。 |
