内参不齐，怎样调整使内参齐了？

我用的是TCA法蛋白定量，目的条带出来了，可是内参actin总是发现不一致，可以重新跑胶在内参条带暗的地方加大上样量吗？这样做会不会影响最终结果的准确性，内参一致了能说明什么?是不是内参一致就表明上样量一致呢?

药物学药理学

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我理解的是内参一致可以算是上样量一样。内参越黑的蛋白，上样量越大吧？你用的是压片做的？我只做过ccd成像系统的。灰度值越高蛋白越多。

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2024-11-20 21:27:38

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两个办法：考染后根据内参条带调整上样量；根据内参western结果调整上样量。

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2024-11-20 21:30:29

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内参不齐，说明你在蛋白定量时不准确，没有把所有的样品都稀释成一致的浓度，若有未变性的样品建议重新定量变性，可换一种定量方法，比如BCA蛋白定量法。若没有样品了，可根据你的内参结果调整上样量，等内参基本一致的时候，做出来的目的条带才有说服力。

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2024-11-20 21:39:01

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内参条带不可能做到特别完美如果差的很多那么就根据条带的差异来调整上样量内参粗的上样量低一点内参细的上样量多一点直到肉眼看上去差不多就行了。

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2024-11-20 21:46:37

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