2024-11-22 10:21:23

求问腺病毒感染慢病毒构建的稳转细胞株,为什么感染不上呢?原来未构建以前效果很好的?

我用腺病毒感染稳转细胞株,用到50微升的量都感染不起来,荧光不表达,PCR验证不出来?求问如果用polybrene该怎么加,转染之前预处理还是加病毒的时候加进去? 

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细胞生物学×

2个回答

首先建议实验前做个预实验,感染量做个梯度,摸下最适浓度;如果需要加polybrene,按千分之一加即可,感染时加入到体系中即可。 

2024-11-22 10:21:46

1. 慢病毒感染⑴ 第一天按实验需要将细胞铺板(比如24孔板)。细胞数以第2天密度约50%为宜。37℃ 培养过夜。⑵ 第二天感染前,从-80℃冰箱取出病毒后冰浴融化,参考相关文献或者根据预实验得到的MOI值用新鲜完全培养基将病毒稀释成所需浓度。注意:轻轻混匀,不要使用振荡器。⑶ 吸去细胞原有培养基,将按照MOI稀释好的病毒液+培养基+ Polybrene(对于293细胞,终浓度6μg/ml)加入细胞中,轻轻摇匀。37℃培养过夜注:病毒液-培养基- Polybrene混合液,按如下操作制备混合液:①添加完全培养基(60mm培养皿2ml,100mm培养皿3ml),37°C预热;②加入病毒轻轻混匀;③加入Polybrene至终浓度为2μg-12μg/ml。轻轻混匀。以上每个成分需要按顺序加入。当MOI高于20时 ,我们建议客户添加Polybrene(终浓度2~12μg/ml,浓度因不同的细胞而异,具体的请参考相关文献)来提高病毒的感染效率。 

2024-11-22 10:22:56

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