首先确认你的药本身没问题，配制方法、浓度什么也正确。你可以咨询一下代理或去官网看。48小时细胞太密了的话，铺板时细胞密度少些。

确认下细胞是否有问题。有时候国内买的细胞可能不是真的细胞；多设置几个药物梯度（我们一般都是做九个梯度）；24h和48h接种不同的细胞密度。

我觉得没有关系，从我做CCK-8结果来看，细胞密度对IC50的影响不大。

如果24h和48h铺同样的细胞密度，肯定会造成一个OD值大，一个OD值小。

镜下观察细胞状态，加药的和对照组之间死的细胞多不多？第一点：你手里的细胞以及状态都跟文献报导不一样的，你要摸一下药物的作用浓度；第二点细胞密度和作用时间也是你需要观察的，一般都是要做多个时间点的，药物还有半衰期等多种因素都是需要你去实践的。

会不会与每个孔中细胞的数目有关系？如果你每个孔中细胞数目与文献采用的细胞数不一样，也会导致抑制率不同。还有细胞还受培养环境的影响，温度溶剂都与文献报道的一致吗？并且实验的干扰因素也很多，建议每一批次做三次重复实验。