呵呵,这个得慢慢来啊,. sequence analysis是最基本的,所以homolog总是可以找到的。很多都有已知的DNA binding motif,可能有已知的binding sequence,然后就搜human genome database,找可能的targets,然后想办法verify。2. 功能性研究也是可以的。比如是影响代谢?影响细胞凋亡?还是啥的。大致方向知道了,就可以就某条pathway中测试。3. RNA microarray过去是常规的找TF的targets的方法,但是事实证明这很依赖于实验设计,可能一无所获,可能被误导,当然也可能一下就有很好的发现。多少也有点运气吧:)也值得试试看。 |
你这个情况跟TF不同,TF主要偏molecular biology的方法。而adaptor这种主要方法都偏biochemistry一些。1. 比如二楼说的co-IP,或者co-IP之后加mass spec。biochem的方法。2. co-localization啥的。3. 老鼠或者人的不同tissue的expression确定是否一起表达等等。4. 找partner和work out pathway还不太一样。如果要找上下游基因,可以knockdown以后互相rescue,可以确定上下游关系。 |
基本上一些已知的domains都有确定的功能。比如DNA binding domain,kinase domain,protein-protein interaction domain啥的很多都知道。否则完全靠IP有点太盲目,就彻底拼运气了。比如你没有找到DNA binding domain,那就不要做ChIP,没有意义哈。再比如,你做sequence analysis可以找到最近的homolog,那在哪个pathway里面应该大致有数了。做些siRNA knockdown,然后rescue啥的,就可以大致定位这个B在这个pathway里面的位置了。因此哈,咱现在研究蛋白基本全部从sequence analysis开始,研究结构,然后再研究功能。这个基本程序已经很成熟了哈。 |
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