我在肺癌细胞中单转p53连荧光蛋白DsRed的质粒，屡转屡败，已经两个月了，目前实在是找不到问题出在哪里。情况是这样的：1. 相同细胞系和相同的质粒，我的师姐在几个月前能够很容易就转染过去，甚至能够和其他质粒共转，高表达，确信无疑。而自从八月由我接手以来，却一次也没有成功，不论共转单转p53（转染试剂lipo2000和质粒用量都是参照以前师姐实验的，同时加大质粒量和减少质粒量也都做了），结果是一点荧光都没有（不是转染效率低的问题，是一点都没有）！！！质粒用我自己扩的，也有师姐留下的，都不行。2. 我转染另一个相同DsRed载体，目的基因片断比p53短一些的质粒，却能够很好的表达。（可见不是载体不行，不是细胞不行，不是溶液试剂不行，不是我的共焦显微镜光路不行！）同样，转染其他不同载体的质粒，也能够正常表达。3. p53这个质粒我刚做了双酶切和PCR产物电泳鉴定，确认质粒没错。4. 质粒抽提是用进口的QIAGEN试剂盒，抽提的p53质粒OD值260/280在1.76-1.80之间。5. 换了我们实验室的PC12细胞系作p53转染，结果同样是看不到有表达。6. 我的清洗液是加了双抗的，细胞状态有时也不太好，但我认为这些因素不足以导致我一点都转不进去。毕竟，我作其它质粒的转染都没有问题的。
问题到底出在哪里呢？？？我百思不得其解。我也是快毕业的人了，火烧眼眉毛，请各位老师前辈师兄弟姐妹帮我出出主意吧，不然我快要疯了～