我在用洗涤的兔血小板做血小板聚集实验，我的实验过程中洗涤兔血小板后，用含钙2mM的Ca2+缓冲液悬浮血小板，血小板发生自聚，不知道究竟是什么原因？以下是我的实验过程和条件摸索情况。血小板制备：雄性兔子取血后，以3.8%枸橼酸钠1:9抗凝/ACD也试过，全血4℃，250×g离心10min得PRP，然后用3倍的无钙明胶台氏液（137mM NaCl,2.7mM KCl,11.9mM NaHCO3,1mM MgCl2, 5.5 mM glucose,0.23mM EGTA and 2.5g/L 明胶，PH=6.5.）洗涤血小板，4℃，900×g离心10min得血小板，洗涤两次。最后，将血小板悬浮在台氏液中（不含EGTA，含有1.8mM CaCl2,PH7.4）。血小板洗涤液和悬浮液也试过试验方法学上无明胶有BSA的方子，还把钙离子的浓度做过调整（0.25mM-2mM）,血小板在洗涤液中不会发生自聚，有时在加入悬浮液后自聚，有时在聚集仪上实验时发生40min内的最大聚集率为20%的可逆性聚集，我实在不知道问题出在哪了？悬浮液我也换过，钙离子浓度也调整过，自聚经常发生，请各位老师给予指教，万分感谢！（ps：悬浮液无钙加入诱导剂后血小板不聚集）