2024-12-19 03:46:54

如何排除一个蛋白是否是一个基因的转录因子 ?

如题,我发现了一个蛋白可以影响一个gene的转录水平,但是预测该基因启动子并未发现有这个蛋白,我倾向与这个蛋白通过调节别的转录因子来调控这个gene,但是预测没发现结合位点就排除有点不靠谱,应该用实验验证,但是如何用实验验证有些犯难了,直接chip实验然后pcr,还是双荧光素酶报告基因验证?具体如何排除?恳求达人提供思路,多谢!!!


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细胞生物学×

4个回答

1. 这种转录水平的变化是否稳定而可靠?换言之,你是否在多个细胞系里做过表达及敲减都能做出一致的结果?2. 如果你在做癌症相关,建议去oncomine或cbioportal建立在癌症样本中两者的相关性3. 建议搜索GEO网站查找该转录因子相关芯片或RNA-seq或Chip-seq数据,观察是否有你的靶基因X4. 建议利用较专业的网站如genomatix来进行启动子分析(可免费适用一周,后续需付费,总共要约1000RMB/月)5. 如该转录因子在Millipore有相关CHIP试剂盒,建议直接购买试剂盒


2024-12-19 03:47:27


别想那么远,先干扰或者过表达 看看下游蛋白水平


2024-12-19 03:47:49

同意楼上观点,应先证明敲降或者过表达该转录因子后能看到靶基因有变化!


2024-12-19 03:48:06

要排除A蛋白不是转录因子,但是确可以调控B的转录水平(mRNA表达量变化)。

  1. 查文献,了解A蛋白功能,调控B的转录水平(mRNA表达量变化),可能A是一个转录后修饰蛋白,稳定或延长B mRNA的半衰期。这个时候需要加入Actomycin D试剂实验。

  2. 确定A招募转录因子或者组蛋白修饰调控B转录,一般也是需要查文献,没有文献报道A是转录因子,

    2.1. A招募转录因子,大海捞针的就只有IP拉下与A项目作用蛋白,质谱后确定候选蛋白,实验验证。

    2.2. OE/KD A后,分析B启动子或TSS附近区域的组蛋白修饰(RNAPol II 2/5位磷酸化,H3K4或H3K27 或组蛋白乙酰化修饰)2

  3. 要彻底排除A不是转录因子,直接结合B启动子。也许只有chip-seq。用anti-A抗体拖下相互作用DNA,测序,发现没有B启动子或TSS区域的序列(这个实验应该能排除。)

2024-12-20 03:53:21

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