2024-11-16 08:22:01

多糖纯化后醇沉无沉淀,为什么?

水提醇沉一种植物多糖,50度加温复溶,用大孔吸附树脂AB-8,37度24小时振荡除色素,然后用0.45的滤膜除菌,用5000分子量的超滤膜包去除小分子和部分色素,浓缩到非常小的体积,4度过夜醇沉竟然什么都没有,没有沉淀。我以上的处理过程不应该有什么问题吧,为什么没有沉淀呢?

 


回答 0 评论
您已邀请来回答问题
医药科学×

3个回答

给你三条建议:1. 尝试用搅棒摩擦容器壁形成晶核。2. 如果还是没有,能不能查到目标物的溶解度,多糖的量是否足够多。3. 目标物是不是在纯化过程中被吸附、滤除、分解(pH=?)。


2024-11-16 09:27:49

纤维素凝聚能够重复利用,而且脱色效果是很明显的~何况凝聚能够再生,有条件的话直接上凝聚。多糖一般脱色必然伴随糖的损失,特别是采用大孔树脂,这个你实验室要是有人做植化,你可以看看大孔树脂一般用在什么时候。植物多糖里面蛋白含量一般是比较少的,同时采用氯仿正丁醇方法脱蛋白,多糖损失可达40%左右,但是一般脱4次依然还有中间层,要是精密测含蛋白量,就用生化的凯氏定氮法,但是我觉得不用这么复杂,因为在后续纯化过程中蛋白是越来越少的。之前脱色素,有人采用石油醚脱色素,要是你的药物中糖分少的话就用它吧~效果还是比较好的。脱完色素的药渣算产率要按照原始重量算。一处理就没有了,就换换,一般多糖是水溶的,至少溶于热水。醇沉的时候把握好水提夜的浓度,太稀的话浪费酒精,而且沉淀也很慢~注意好比例再试试~醇沉3次后多糖颜色会较淡~真空干燥和冻干的颜色差别较大。查查看你的药物里面含糖量有人做过没~有,是多少;没有,看看它的功效或者再找文献。测不出糖浓度,看看是不是其他干扰,比如试剂问题,苯酚有没有问题,仪器问题~有时候出问题不一定是实验本身的问题,再就是实验要淡定,不要急躁。


2024-11-16 10:11:28

用5000分子量的超滤膜包去除小分子和部分色素,以我的经验,超滤膜包的损失还是很大的,如果你的样品本来就不多。你可以试试透析袋,虽然慢一点,但是不会有死体积的损失。另外你最开始水提醇沉得到的多糖是否测过多糖含量?不会是蛋白、色素啊之类的占有太大比例吧?鉴于你的步骤太多,都做完了很难找到出问题的步骤,建议你每一步做完都测一下多糖含量,这样很快就能找到出问题的步骤。

 


2024-11-16 10:50:48

你的回答