我想通过EMSA来检测受体突变对NF-κB活性的影响。我做的受体转染后的表达时间约是36h到48h，刺激后多久提核蛋白比较合适？如果我还想检测细胞上清中的IL-8，那应当在刺激后多久收上清比较合适？请各位高手不吝赐教。
我做了挺多实验总结的大概情况希望能帮助你：
受体结合类的直接刺激激活信号通路的方法，一般达到EMSA核转运高峰的时间比较短，大概控制在30min-1.5min之间，很多时候都是在45min和1h达到高峰，当然还有合适的浓度
转染的方法的话我自己做的比较少，但是看过一些文献，在保证转然效率的情况下一般根据你蛋白表达的情款看看，一般控制在转然后12－48小时之间，但是因不同细胞种类不同时间剃度不同，建议做大的剃度筛选后在做小的有效剃度筛选o
我觉得都可以试试～这就看抗体与探针究竟谁与蛋白结合力更强了～还是存在竞争的～
