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2024-11-23 04:51:06

MTT细胞毒性试验加药组高浓度的OD值比低浓度的高，为什么？

做的第一次预实验是药物组比对照孔（只加细胞不加药）的OD值都高，对照孔的OD值0.2左右，然后实验室的师兄师姐说对照孔的OD值太低了，建议我多养几天。于是我就把细胞种完96孔板(种了2个板）之后，一个养了2天，一个养了3天。养了2天的对照孔OD值到0.4左右，养了3天的OD值到0.6左右，养了2、3天的都能得出加药组的OD值比对照孔的低，这至少能说明我的药物是有抑制作用的（我要的也是抑制作用）。但是养了2天的加药组的高浓度到低浓度OD值却是由高到低。养了3天的OD值最低浓度的能得出比最高浓度的高，但是由高浓度到次低浓度的OD值却还是由高到低，我真不知道原因了，为什么会这样？
我养的是子宫内膜细胞（不是肿瘤细胞），种的是96孔板，4000/孔，每孔200ul,养2-3天后，去除培养基，加药200ul,作用24h后，去除药物，加入含MTT的培养液200ul,药物是由高浓度稀释为低浓度的。为了排除药物对OD值的影响，我甚至在加MTT前，用PBS清洗了96孔板，但到底是什么原因导致这种状况，次低浓度的孔OD值才0.07左右。是我种板没种均匀吗？我每加5个孔吹打一次的。请求各位前辈能帮我找找原因，能解答我的疑惑，在此先谢过大家了！

生物化学细胞结构

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4个回答

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假设你的药物是真的可以抑制这个细胞并且剂量依赖的话，作如下可能性推测：

1、药物配置有问题；【这个可能性我觉得不高，但也是关键的一点】
2、每个孔细胞数目有问题；【铺完细胞后镜下观察下是否基本均匀一致】【强烈建议用12道连续移液器】；

3、药物作用时间不够，效果没显示出来。我们做药效一般是第1天铺细胞，第2天加药，药物作用3天，第五天测OD。仅供参考。

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2024-11-23 05:22:11

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看这个意思，低浓度的药物就足够抑制生长了，为什么还要尝试更高的浓度呢，如果要看dose-dependent，也应该把浓度再降低吧

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2024-11-23 05:26:23

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细胞没种匀的可能性大些，另外OD值偏小，可适当调高细胞密度，种板前弄块观察板，大体观测下是否是你需要的密度。还有不知道你是怎么加药的，如果是直接用的药物母液是否和原培养基的血清，Gln,浓度一致，如果不一致，在加这些母液时，血清浓度及gln,glu浓度发生变化，有可能影响实验结果

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2024-11-23 05:27:25

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可能是：1.细胞状态不佳，2.加药前，不同药物浓度处理组间的细胞生长情况不一致，3.孔的位置，例如靠边缘的孔；4.药物本身的量效关系；5.多设些复孔再做做

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2024-11-23 05:29:01

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提问时间：	2024-11-23
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