up vote 597 down vote

2024-11-18 17:55:51

HPLC-IEC 保留时间不一致问题

做HPLC-IEC测试样品与原研药电荷一致性时发现，两者保留时间不一致，相差3min.方法一共才35分钟。峰型是一致。在离子交换色谱中，保留时间与样品的电荷量，缓冲液的洗脱比例，缓冲液pH等有关。对于缓冲体系是一致的，样品也统一置换到相同的buffer中，样品的PI值正在送检测试。
想请教各位，除了样品本身pI值不一致导致带电量差异，还因从哪些方面考虑这个保留时间不一致的问题？

生物制药药物化学

回答 0 评论

更多

4个回答

up vote 22 down vote

可以排查一下，是不是原研药放置了一段时间，导致IEC上整体峰偏移。我最近做的一个项目，就有这个问题，原研药放置一段时间后，离子交换上主峰前移几分钟。拿刚开封的原研药做IEC，确是跟我们的样品主峰出峰一致。目前我们也在找原因，解释这个问题，初步怀疑是制剂中缓冲液的影响。

0 评论收藏举报

2024-11-18 20:00:43

up vote 16 down vote

还有一个关键的，温度，如柱温、流动相温度、室内温度

0 评论收藏举报

2024-11-18 20:13:51

up vote 19 down vote

一个配好的流动相，在使用一天后，ph会有一定的变化，保留时间变动很正常。但是你说的三分钟太大了，很可能是你的色谱柱快要挂掉了。你样品里面有什么成分，或者样品不干净。还有一种可能，你使用的液相是不锈钢官路，使用前，要使劲用酸冲一冲，把它钝化一下

0 评论收藏举报

2024-11-18 20:15:13

up vote 23 down vote

我想你肯定是在同一台液相上先后进样发现的差别，那么什么柱温、缓冲液等理由应该都不成立。
还有一种可能请注意一下，两个产品是否糖型存在很大差别？糖型差别导致了体积异构，这样有的离子基团没有暴露，因此造成结合能力还是有差别的。

0 评论收藏举报

2024-11-18 20:15:54

你的回答

提问时间：	2024-11-18
浏览量：	4080
最近回答：	2024-11-18

相关问题

mRNA的表达量是升高的，能否说明那它的蛋白质的表... 回答 11

有别的办法可以有效回收SDS-PAGE中的蛋白条带... 回答 6

如何预估止水帷幕的防渗系数？回答 18

对悬浮细胞做激光共聚焦荧光扫描成像如何做粘附处理，... 回答 9

参与后续反应的基因毒性杂质如何控制？回答 5

2-DE的差异蛋白还需用Real-time RT-... 回答 5

1HNMR中活泼氢用什么溶剂？回答 10

酯化脱水怎么提高转化率？回答 6

原料稳定，制剂却不稳定，老是降解怎么办？回答 6

超声波破碎有什么具体的要求吗？回答 11