预期把pgk这段基因插入到PNZ8148载体上,PNZ8148载体选了hindIII和NCOI两个酶切位点,然后先是利用in-fusion试剂盒把pgk插入PNZ8148载体,一直都没有成功,现在直接用hindIII和NCOI酶切pgk,然后用T4连接酶连接,还是不成功,而这个PNZ8148载体老是酶切就没了,做了一个月就酶切成功过一次,求助哪位前辈有接触过这个载体的,帮忙解答一下。谢谢~
酶切完后是否测过核苷酸浓度,即使切碎了也有大量核苷酸,切完后纯化试剂盒是否效率比较低,大多都浪费了。