如果抽得质粒全是杂菌的话，测得浓度和OD值会不会和正常的质粒不一样呢？

小提质粒，挑取单克隆于3毫升LB培养基培养6小时候抽质粒，发现浓度只有50纳克每微升。后来重新挑取单克隆于10毫升LB培养基培养14小时，收集10ml菌液进行离心，裂解，上柱（10ml菌液只上一个柱子，量绝对足够了吧），结果浓度才300纳克每微升，我本计划下步做转染，如此低得浓度我很是担心啊
不知道大家有没有遇到过此情况。我用的是pEGFP-N2质粒，是高拷贝的。
PS：我怀疑是不是抗生素失效导致杂菌污染，如果抽得质粒全是杂菌的话，测得浓度和OD值会不会和正常的质粒不一样呢？

细胞生物学

回答 0 评论

up vote 15 down vote

你3毫升才摇4小时，肯定浓度太低了，细菌都没长多少。一般都得12到16小时。

0 评论收藏举报

2024-11-21 18:04:19

up vote 12 down vote

提高抗生素浓度！用天根的中抽kit

0 评论收藏举报

2024-11-21 18:06:07

up vote 15 down vote

4小时能提出50ng已经不错了，10毫升菌液杂质也会相应增加，内毒素会影响转染效率的。LB摇菌对质粒小抽来说不太适合，建议用TB或SB加2mM MgSO4, 2-5毫升菌液保证供氧充分，摇24小时后加170ug/L氯霉素再摇2小时就能抽出微克浓度的质粒了。不知道你做什么样的转染，如果用量大的话完全可以做大抽。卡那霉素用量建议50ug/mL, 如果在TB这样含磷酸盐的培养基上必须再加到100ug/mL

0 评论收藏举报

2024-11-21 23:13:58

你的回答

提问时间：	2024-11-21
浏览量：	3527
最近回答：	2024-11-21

如果抽得质粒全是杂菌的话，测得浓度和OD值会不会和正常的质粒不一样呢？

3个回答

你的回答

相关问题