自噬LC3跑不出，怎么办？

LC3 大小16KD 18KD
操作如下：
大鼠肝细胞上样量20ug
浓缩胶5% 分离胶12%
电泳80v 20min 80v 70min
转膜 95V 55min 0.2 PVDF膜
封闭8%脱脂奶封闭2h
一抗孵育过夜
二抗孵育2h
结果信号什么都没有，内参也看不到

细胞生物学凋亡坏死与自噬

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60v 跑浓缩
120v跑分离
110mA 转膜
转1.5h后
封闭1小时
一抗 sigma 抗体 1:15000 四度过夜
二康 santa 1:20000 室温
加ECL 压片一般都在10s 内完成

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2025-03-28 05:44:13

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膜用丽春红染色，若有带，可能是抗体或显色液出问题了

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2025-03-28 05:48:38

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LC3B是非常好跑的蛋白之一，用过CST的抗体，新鲜配置抗体，3s都怕过曝。一支能用1-2个月反复用。
关键是，要明确处理因素是不是能引起自噬。

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2025-03-28 05:51:16

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