你贴出来的这个protocol似乎还少了关键的两步, 1)与抗体孵育,让抗体和目的蛋白+DNA结合; 2)加入氯化钠在65度水浴解交联,释放出DNA。 从你的问题来看,你这次的实验可能只是一个预实验,用来摸索sonication的条件,所以上述步骤1可以省略,但是步骤2应该不能少,蛋白质和DNA交联在一起是否可以直接酚氯仿提取DNA,我没有经验,建议你再取一些sample,先解交联,然后再蛋白酶K消化提取DNA试试,只要你的10cm dish 细胞数能达到300万,理论上应该能在DNA胶上看到很亮的带。另外,我注意到你先用10ml lysis buffer,然后离心取沉淀,再用1ml lysis buffer,最后只取了20ul 来提DNA,可能确实量少了点,为什么不能多点呢?100ul如何?另外,建议你参考Upstate公司ChIP试剂盒的protocol来做,不一定要买他的kit,因为kit里面的各种buffer都可以自己配制,这个protocol似乎在文献中应用的更普遍。
|