流动相一般用甲醇水，若分不开用其它流动相系统。先在分析柱上走一梯度，如在40分钟内20%甲醇循序提升到80%甲醇（可以推算出时间对对浓度的直线方程），看分离效果怎样，所要的峰（假设有两个，保留时间为t1和t2切t1<t2）有没有出现，有没有和其它的峰分开。若分开了，根据直线方程推算出t1五分钟前时间点的甲醇浓度，在以此浓度洗脱样品，观察分离效果，若效果不佳，可以在此浓度附近适当调整。attention:分析柱上保留时间最好控制在10-20分钟之间（太短，两峰重合，误判为一峰；太长，峰形差，且所需溶剂增加），因为到制备柱上保留时间会增加，所需溶剂大大增加，回收可不是件简单的事啊。

注意溶解后过膜，别堵柱子，还有就是不同内径的柱子上样量不一样，别上多了，还有就是走梯度还是等度了，都不一样的。

根据HPLC，你物质出峰在10min左右，那就用这个流动相试一试，再稍调节即可