NF-kB p65活化后总蛋白增加么？为什么免疫组化看不到入核

我的实验想观察缺血再灌注后NF-kB p65的活化。做了免疫组化和western blot。

请教一下各位老师同学：1、western blot提示胞浆和胞核蛋白均明显增加，与正常对照组均有明显差异。这说明总的NF-kB p65增加了吗？我看丁香园中有的前辈说总蛋白是不变的。请问为什么western的结果是这样？
2、我还应该做NF-kB P65总蛋白的western吗？
3、缺血再灌注损伤后免疫组化可见胞浆中的NF-kB明显增加但看不到NF-kB入核，不知道为什么看不到明显的入核改变。是取材时间的问题吗？有朋友说是一抗的问题，是这样吗？我看到外文文献中做NF-kB的免疫组化的很少，但有个别文献做了NF-kB的免疫组化，并且能够明显看到核转移，不过他图片上的胞浆中NF-kB表达的很少？这是为什么呢？

多谢各位前辈多多指教！

免疫学分子生物学

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总蛋白应该是p-p65增加吧

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2025-03-30 19:07:08

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在经典的短时TNFa刺激的通路里p65的总量确实是不会变化的。
但不知道你的处理会不会对总量有调控效应。其实这个不太重要，重要的还是进核有没有增加。p65是个转录因子，如果你的检测进不了核，那别人还是会怀疑你上调的p65有没有真的发挥作用。可以的话检测一下p65的靶基因的转录有没有改变。
也可以改做组织免疫荧光，灵敏度会高一点。

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2025-03-30 20:45:39

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你做组化做了多长时间？确定你做出来的就是真实的情况？还是抗体和条件没摸索好？

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2025-03-30 20:46:58

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提问时间：	2025-03-30
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NF-kB p65活化后总蛋白增加么？为什么免疫组化看不到入核

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