如何解决于AnnexinV--FITC/PI凋亡染色的问题

做AnnexinV--FITC/PI凋亡染色，做之前细胞状态不错的，可上机后发现细胞大面积死亡。做得时候自认为还是比较小心的，胰酶消化也就1min左右，会不会是试剂的问题？还是操作的问题？可能是什么原因？实在苦恼！谢谢！

细胞生物学

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其实你可以选择Biotin标记的AnnexinV先处理细胞，这样早期凋亡的细胞会在胰酶消化前结合上AnnexinV，胰酶消化后再加入荧光标记streptavidin去上流失，这样胰酶操作过程中带来的误差就能大大减少了。

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2024-10-28 17:22:09

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tunnel主要是检测晚期凋亡，FITC/PI是检测早期凋亡的

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2024-10-28 17:32:10

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PI染色不宜过长，否则流失第三象限回出来大量的假阳性，其实AnnexinV-FITC/PI检测贴壁细胞的凋亡不是最佳选择。

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2024-10-28 17:35:06

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胰酶对annexin V的染色影响很大，建议用PBS洗后直接吹下来！

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2024-10-28 18:17:51

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如果是黏附性很强的细胞，不建议用annexin V 做，可以试试tunnel 染色；
如果不行就用细胞刮刮下来，用PBS先洗，在一过性的刮（不要反复，来回），这样死细胞多些，但效果比胰酶好！如果是像293一样的细胞，直接培养基就冲下来了！

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2024-10-28 18:24:35

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