2倍差异表达只是一种较为常用或通用的做法,具体到个人的实验,肯定不是这样的。如果是2倍差异,那qPCR结果很可能是4倍以上。 |
基因芯片挑选差异基因的原则: 2、如果是挑表达上调的差异基因的那组样本,那么必须信号值为检出(表明为P的基因);如果是挑表达下调的差异基因的那组样本则原则可以不考虑信号值,但在定量PCR验证时会不能检出。——所以最好还是都选信号值检出的基因。 |
芯片数据分析时选择2倍或0.5倍作为一个标准,其实是一个比较省事或者说比较傻的一个处理方式,为什么要选择2作为一个杠杆呢?参与生命过程中的重要基因往往微小变化就能引起生命过程的颠覆,因此要根据自己的试验目的,别漏掉了哪些重要的东西! |
基因芯片本身是高通量的检测方法,由于一次性检测基因数目较多,不可避免的出现假阴性和假阳性,这就是为什么芯片一般需要重复试验,甚至同一张芯片上都要有不同对照的目的,我个人认为客观的说应该把基因芯片定位在高通量、初筛的定性检测手段,芯片的结果只是给你下游试验提供一些线索,mRNA水平的表达必须通过定量PCR来验证,不能直接利用芯片的结果来区分基因表达量的差异。 |
其实,任何技术都很难在高通量与准确度上两全的,芯片只是用来初筛,将范围缩小在一个空间内,至于筛选的标准各个平台有不同的方式。 |
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