重复多次WB,改变上样量,做抗体浓度梯度,大面积裁膜孵育一抗,可是TMUB1这条带始终曝光后是一片黑,其余都能曝出。因为其余的目的蛋白都能曝出,操作应该没有错误,还能怎么改进才能曝出条带。试着裁了块不相干的条带(分子量离得很远)孵TMUB1的抗体,最后曝出来也是一片漆黑。这说明了什么啊?图中条带是内参,下面模糊的是TMUB1,只压了几秒,稍微再久点就是漆黑一片了。
有可能是一抗的问题,也可以试试调调二抗的浓度