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2024-11-06 09:19:50

做dominant negative 显负性突变的可行性？

做dominant negative，DN下游信号分子，所看的文献都是人家惠赠的。不知道自己做是不是很耗时耗钱？并且我看到某篇文献，DN和siRNA同一分子，结果也不一样，前者是阳性结果，后者是阴性。SiRNA我知道是表达下调，不是完全的敲除，siRNA效率在文中达到80%才用于下一步试验。作者解释是，siRNA了这个分子后，还有其他分子代偿性表达增高造成的。所以，DN是不是要比siRNA更有说服力？或者说siRNA根本就不能说明问题？

凋亡坏死与自噬

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最好的做法是在用siRNA抑制内源目的基因表达的基础上表达DN，并且使DN的表达水平同内源的目的基因表达水平一致，以表达WT的细胞作为阳性对照，预期的结果是：WT的表达可以回复由siRNA带来的表型变化，而DN不能回复。

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2024-11-06 10:03:43

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点突变kit去做做
两天就能出斑斑
一晚摇出菌液液
再把序列给测测
然后大提质粒粒
接着转染细胞胞
拿到数据答辩辩

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2024-11-06 10:08:37

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提问时间：	2024-11-06
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