2024-12-20 20:09:31

PI3K抑制剂IC-87114如何使用?

我想请问下IC-87114的使用方面的问题。 是selleckchem公司的产品
1.该产品说明书上写有几种液体的溶解度,我准备用该产品做细胞实验,是否只能用水来溶解?但是说明书上没有溶于水的储存方法和保质时间,只有DMSO的储存方法和保质时间。如果用DMSO溶解,能否用于细胞实验?
2.我买的规格是5mg,打算在原装管里溶解再分装,但是该产品的溶解度比较低(水,乙醇,DMSO均小于1mg/ml),我担心溶解不完全从而确定不了溶液的浓度,请问我该怎么解决?3.我查到该产品的孵育时间是2-4h,我想请问是把该产品加进细胞里2-4h后该产品的作用就消失了还是会继续有作用?如果超过这个时间会对细胞有什么副作用吗?比如说会有细胞毒性之类的?

求回复,谢谢!


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3个回答

 一、DMSO在细胞培养中的浓度不能>0.1%,这点并不是绝对的。应该大致做个DMSO的浓度曲线,看其对该种细胞特定检测指标的影响,看看1%是否会对你所要检测的指标造成显著的影响。如果有显著影响,就将1%DMSO组作为溶剂对照来消除这种影响。还应注意在加药作用细胞时先用培养基稀释好试剂在加入细胞,以避免DMSO局部过浓对细胞造成的损伤。

二、如果原装管小于5ml,肯定要换到其他容器溶解。


2024-12-20 20:25:37

如果要用抑制剂处理细胞,你需要做两种平行,一做浓度梯度,二做时间梯度,因为在不同的细胞不同的处理,药物作用时间是不同的,如果你要作用于PI3K,那么这个时间应该不长,你可以先预处理一个小时


2024-12-20 20:38:09

也许文献配的母液是100x?,溶解度好的一般用1000x, 10000x。
看过一篇PI3K抑制剂的原研药厂文献,药物对培养细胞中的靶蛋白大概是这个动态——加药30分钟后,换普通培养基;2小时出现抑制效果,8小时抑制效果最佳,16小时磷酸化恢复,24小时回复到了0小时的水平。好像叫pulse chase实验。
另外,杂七杂八的文献也提供抑制剂持续加2小时、6小时、12小时、2,3,4,5……天的后续分析。


2024-12-20 20:51:41

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