最近在做DRG神经元细胞的活性氧检测,购买的是sigma的DCFH-DA,回去自己分装,10mM贮存液,-20保存,使用时稀释到10umol/L使用,可是荧光特别浅,后来提高到100umol/L阳性组只能看到少量的核被染到,con组更是用confocal都照不出来,不过我不是用无血清培养基稀释的,是用DMEM-HG稀释的,请问是因为这个问题么,还是存在别的问题,谢谢各位了
可能是细胞活性不好,探针进不去,以前做干细胞也遇到过这样的问题
与探针孵育的时候将细胞消化下来试试,同时孵育时定时晃动体系
dcfh-da是什么?是不是你的那个神经元有问题,用二抗了吗